Vragen en antwoorden over celkweek

Veelgestelde vragen en antwoorden over celkweek

Hoe kies je een speciaal kweekmedium voor cellijnen?

Er zijn geen vaste kweekvoorwaarden voor het kweken van bepaalde celtypen. Cellen die in MEM zijn gekweekt, groeien waarschijnlijk gemakkelijk in DMEM of M199. Kortom, MEM is de eerste keuze voor aanhangende celkweek en RPMI-1640 voor suspensiecelcultuur is een goed begin, en AIM V (12005) medium (SFM) is de beste keuze voor serumvrije kweek voor verschillende doeleinden.

Is L-glutamine belangrijk in celkweek?

Is het onstabiel in oplossing? L-glutamine is belangrijk in celkweek. Nadat de aminogroep is verwijderd, kan L-glutamine worden gebruikt als energiebron voor gekweekte cellen, die deelnemen aan eiwitsynthese en nucleïnezuurmetabolisme. L-glutamine zal na enige tijd in oplossing worden afgebroken, maar de exacte afbraaksnelheid is nog niet definitief. De afbraak van L-glutamine leidt tot de vorming van ammoniak, wat giftig is voor sommige cellen.

Wat is GlutaMAX-I? Hoe GlutaMAX-I te gebruiken voor gekweekte cellen?

Hoe stabiel is dit dipeptide? GlutaMAX-I-dipeptide is een derivaat van L-glutamine en de onstabiele alfa-aminogroep wordt beschermd met L-alanine. Een peptidase splitst geleidelijk het dipeptide, waardoor L-glutamine vrijkomt voor gebruik. GlutaMAX-I dipeptide is zeer stabiel Zelfs als het gedurende 20 minuten wordt gesteriliseerd op 121 pond, vertoont GlutaMAX-I dipeptide-oplossing een minimale afbraak. Als onder dezelfde omstandigheden L-glutamine bijna volledig wordt afgebroken.

Welk medium kan worden weggelaten om fenolrood toe te voegen?

Fenolrood wordt gebruikt als een pH-indicator in het kweekmedium: het is rood als het neutraal is, geel als het zuur is en paars als het alkalisch is. Studies hebben aangetoond dat fenolrood de effecten van steroïdhormonen (vooral oestrogeen) kan nabootsen. Om sterolreacties te vermijden, gebruikt u een medium zonder fenolrood bij het kweken van cellen, vooral zoogdiercellen. Omdat fenolrood de test verstoort, gebruiken sommige onderzoekers geen met fenolrood toegevoegd medium bij flowcytometrie. Fenolrood wordt gebruikt als een pH-indicator in het kweekmedium: het is rood als het neutraal is, geel als het zuur is en paars als het alkalisch is. Studies hebben aangetoond dat fenolrood de effecten van steroïdhormonen (vooral oestrogeen) kan nabootsen. Om sterolreacties te vermijden, gebruikt u medium zonder fenolrood bij het kweken van cellen, vooral zoogdiercellen. Omdat fenolrood de test verstoort, gebruiken sommige onderzoekers geen met fenolrood toegevoegd medium bij flowcytometrie.

Hoe tel je levende cellen met trypanblauw?

Verdun de celsuspensie tot 200-2000 cellen / ml met serumvrij medium en voeg 0,1 ml 0,4% trypanblauwoplossing toe aan 0,1 ml celsuspensie. Meng voorzichtig, tel na een paar minuten de cellen met een hemocytometer. Levende cellen verwerpen trypaanblauw, dus blauw gekleurde cellen zijn dode cellen.
Hoe de vervuiling van weefselkweek te elimineren? Bij belangrijke cultuurverontreiniging kunnen onderzoekers proberen de besmetting te elimineren of te beheersen. Bepaal eerst of de verontreiniging bacteriën, schimmels, mycoplasma of gist is, isoleer de besmette cellen van andere cellijnen, desinfecteer het kweekvat en de ultraschone tafel met laboratoriumdesinfectiemiddel en controleer het HEPA-filter. Hoge concentraties antibiotica en antimycines kunnen giftig zijn voor sommige cellijnen.Daarom wordt een dosis-respons-experiment uitgevoerd om de dosisniveaus van antibiotica en antimycines die toxiciteit veroorzaken te bepalen. Dit is vooral belangrijk bij het gebruik van antibiotica zoals amfotericine B en antimycotica zoals tylosine. Hieronder volgen aanbevolen experimentele procedures om het toxiciteitsniveau te bepalen en kweekverontreiniging te elimineren. 1. Verwerk, tel en verdun de cellen in antibioticumvrij medium tot een concentratie voor regelmatige celdoorgang. 2. Dispergeer de celsuspensie in een kweekplaat met meerdere putjes of in verschillende kleine kweekflessen. Voeg binnen een concentratiegradiënt het geselecteerde antibioticum toe aan elk putje. Amphotericin B beveelt bijvoorbeeld de volgende concentraties aan: 0,25, 0,50, 1,0, 2,0, 4,0, 8,0 mg / ml. 3. Observeer elke dag de cytotoxiciteitsindicatoren, zoals uitscheiding, vacuolen, verminderde samenvloeiing en afronding. 4. Na het bepalen van de mate van antibiotische toxiciteit, kweek de cellen gedurende 2 tot 3 generaties met een kweekmedium dat 2 tot 3 keer de toxische concentratie van het antibioticum bevat. 5. Kweek de cellen gedurende één generatie in medium zonder antibiotica. 6. Herhaal stap 4. 7. Cultiveer 4-6 generaties in antibioticavrij medium om te bepalen of de besmetting is geëlimineerd.

Wat is de rol van natriumpyruvaat in het medium?

Natriumpyruvaat kan worden gebruikt als alternatieve koolstofbron in celkweek Hoewel cellen glucose als koolstofbron prefereren, kunnen cellen ook natriumpyruvaat metaboliseren zonder glucose.
Hank’s Balanced Salt Solution (HBS) moet in de lucht worden gebruikt en vereist geen CO2-incubator. wat is de reden? Wat zijn de essentiële functionele verschillen tussen Hank’s Balanced Salt Solution (HBS) en Earle’s Balanced Salt Solution (EBS)? Het belangrijkste verschil tussen HBS en EBS is het gehalte aan natriumbicarbonaat, dat hoger is in Eagles (2,2 g / l) dan in Hanks (0,35 g / l). Natriumbicarbonaat moet in evenwicht worden gebracht met een hoog CO2-gehalte om de pH van de oplossing op peil te houden. Eagles-oplossing wordt alkalisch in CO2 op luchtniveau en Hanks-oplossing wordt zuur in CO2-incubator. Als u het weefsel in een CO2-incubator wilt bewaren, moet u de Eagles-oplossing gebruiken. Als u alleen de weefsels reinigt die in het celkweekmedium worden bewaard, gebruik dan de Hanks-oplossing.
Remmen tweewaardige ionen de trypsine-activiteit? Wat is het doel van het toevoegen van EDTA bij gebruik van trypsine? Tweewaardige ionen remmen de trypsine-activiteit. EDTA wordt gebruikt om vrije magnesium- en calciumionen te cheleren om de remmende activiteit van trypsine te behouden. Het wordt aanbevolen om de cellen met EDTA te wassen alvorens de cellen te trypsineren om alle tweewaardige ionen uit het medium te verwijderen. Toen ik SF900 II probeerde, groeiden de cellen goed, maar mijn eiwitproduct was niet zo effectief als toen ik Grace-oplossing en 10% foetaal kalfsserum gebruikte. Als het doeleiwit een laat eiwit is, zal het samen met proteasen tot expressie worden gebracht en deze proteasen zullen inwerken op het doeleiwit. In het medium met serum zullen deze proteasen inwerken op het eiwit in het serum, zodat het beoogde eiwitproduct intact blijft. In de serumvrije formule is het enige substraat voor protease-actie uw doeleiwit. Om dit probleem te vermijden, voegt u enkele proteaseremmers toe of voegt u een kleine hoeveelheid serum toe (minder dan 1%) zodat het serum een ​​substraat voor de protease vormt.

Verandert de pH van de bij 20 ° C bereide buffer bij hogere of lagere temperaturen?

Bij veelgebruikte buffers verandert de pH-waarde met de temperatuur. De volgende tabel geeft de veranderingen in pH weer wanneer de temperatuur verandert met 10 ° C: Als bijvoorbeeld een pH 7,4 Tris-buffer wordt bereid bij 20 ° C, is de pH-waarde 7,4- (2×0,310) = 6,78 buffersysteem pKa / 20 ° C bij 40 ° C [ Delta] pKa / 10 ℃ Mes 6.15 -0.110 Ada 6.60 -0.110 Pijpen 6.80 -0.085 Azen 6.90 -0.200 Bes 7.15 -0.160 Mops 7.20 -0.013 Tes 7.50 -0.200 Hepes 7.55 -0.140 Tricine 8.15 -0.210 Tris 8.30 -0.310 Bicine 8.35 -0.180 Glycylglycine 8,40 -0,280

Wat is de pH van de Tris-HCl-oplossing die is bereid bij kamertemperatuur (25) bij 37 ℃?

De pH van de buffer verandert met de temperatuur. De volgende tabel geeft een overzicht van de verschillende pH-waarden van 50 mM Tris-HC-oplossing bij 4 ℃, 25 ℃ en 37 ℃. 4 ° C 25 ° C 37 ° C 8,1 7,5 7,2 8,2 7,6 7,3 8,3 7,7 7,4 8,4 7,8 7,5 8,5 7,9 7,6 8,6 8,0 7,7 8,7 8,7 8,1 7,8 8,8 8,2 7,9 8,9 8,3 8,0 9,0 8,4 8,1 9,1 8,5 8,2 9,2 8,6 8,3 9,3 8,7 8,4 9,4 8,8 8.5

Wat is de optimale pH en osmotische druk voor het kweken van insectencellen? De pH van het groeimedium heeft een invloed op de celproliferatie en de productie van virussen of recombinante eiwitten. Voor de meeste cellijnen van lepidoptera-insecten hebben de meeste pH-waarden van 6,0 tot 6,4 goede resultaten. Bij het kweken van lepidoptera-insectencellijnen is de optimale osmotische druk van het medium 345-380mOsm / kg. Om een ​​betrouwbare en langdurige celcultuurmethode te garanderen en technische problemen te verminderen, moet u de pH en de osmotische druk binnen de bovengenoemde bereiken houden.
Zijn er nog andere namen voor High Five-cellen? High Five-cellen zijn ook bekend als Trichoplasia ni 5B1-4 en BTI-TN-5B1-4.
Wat is het verschil tussen PFHM-II en HYBRIDOMA-SFM? PFHM-II (Protein-free Hybridoma Medium) is een productiemedium voor monoklonale antilichamen dat geen proteïne bevat. Indien gebruikt als een hybridoma-productiemedium, moet PFHM-II mogelijk worden aangevuld met lage serumspiegels. HYBRIDOMA-SFM is zowel een productiemedium voor hybridoma’s als een productiemedium voor monoklonale antilichamen. Het bevat een laag eiwitgehalte.
Wat is de concentratie wasmiddel in serumvrij medium High Five? Concentratie wasmiddel in High Five serumvrij medium: 0,025 g / l Tween-80, 1,0 g / l Pluronic Poly-all.
Hoe dicht zijn High Five-cellen ingevroren? 3.0x10E6 cellen / ml.
Er vormde zich een wit neerslag in mijn fruitvliegkweekmedium, dat oploste na verhitting. Wat is het? Is het schadelijk voor mijn cellen? Het kan glutamine-neerslag zijn, maar L-tyrosine-neerslag is waarschijnlijker. De concentratie glutamine in het medium is 6 keer hoger dan de typische 2 mM. De concentratie tyrosine is 25 keer hoger dan in RPMI 1640 en is moeilijker op te lossen dan glutamine. Precipitatie kan ook een complex zijn van meer dan één component. Het kan worden veroorzaakt door opslag op een plaats met een lage lokale temperatuur. Zolang het neerslag onder de kweekomstandigheden kan worden opgelost, heeft dit geen nadelige invloed op het experiment.
Hoe sf9-cellen uit de T25-kolf over te brengen? Kan het worden verteerd met trypsine? De methode om cellen te exfoliëren wordt sterk aanbevolen, omdat deze techniek het minst destructief is en de hoogste levensvatbaarheid heeft. Zoals aangegeven in de handleiding, laat het medium op de cellen stromen met behulp van een pasteurpipet. Als optie kunt u zachtjes op de kolf tikken. Probeer alleen cellen te trypsineren als het absoluut noodzakelijk is. Trypsiniseer een T25-kolf met sf9-cellen: 1. Verwijder het medium. 2. Was de cellen met 2 ml 1xPBS (voldoende om het celoppervlak te bedekken) om de PBS te verwijderen. 3. Voeg 2 ml 1x trypsine EDTA toe (bedek gewoon het celoppervlak). 4. Incubeer gedurende 5 tot 10 minuten bij 37 ° C. Kijk onder het instrument en zie dat ze na 5 minuten naar boven bewegen. 5. Voeg 2 ml celkweekmedium toe aan de cellen, breng over naar een conische buis, was de wand van de fles met 2 ml kweekmedium en breng over naar dezelfde conische buis. (FBS in het kweekmedium stopt de activiteit van trypsine. 6. Centrifugeer (1100 rpm) om de cellen te pelleteren. Verwijder het kweekmedium. 7. Resuspendeer de cellen in een nieuw kweekmedium. Passage.

Wat is de hoeveelheid heparine die wordt gebruikt in de suspensiekweek van Sf9-, Sf21- en High Five-cellen? Om de vorming van aggregatie van in suspensie gekweekte cellen te voorkomen, werd een heparineconcentratie van 10 eenheden / ml celsuspensie gebruikt.
Hoeveel generaties kunnen sf9-cellen worden doorgegeven voordat ze opnieuw worden ingevroren? Zal het besmettelijke vermogen afnemen naarmate het aantal passages toeneemt? Normaal gesproken moeten de cellen na 30 passages worden teruggebracht naar cryopreservatie. Bij het tellen moet de levensvatbaarheid van de cellen worden gecontroleerd. Als meer dan 95% van de cellen levensvatbaar en verdubbeld blijft in ongeveer 30 uur of zo, kunnen de cellen nog steeds worden gebruikt. Als de vitaliteit en verdubbelingstijd afnemen, zal hun besmettelijke kracht niet langer effectief zijn.