SARS-CoV- 2 virus in human blood

OVERZICHT

In december 2019 is in Wuhan, China, een nieuw coronavirus geïdentificeerd, dat nu officieel de naam heeft gekregen van ernstig acuut respiratoir syndroom coronavirus 2 (SARS-CoV-2), dat de uitbraak veroorzaakte van een coronavirus-gerelateerde acute luchtwegaandoening, coronavirusziekte genaamd 19 ( COVID-19). Tekenen en symptomen van COVID-19 kunnen 2 tot 14 dagen na infectie optreden, waaronder koorts, hoesten, kortademigheid of ademhalingsmoeilijkheden, spierpijn en vermoeidheid. In ernstige gevallen kan de infectie verder leiden tot longontsteking, ernstig acuut ademhalingssyndroom (SARS), nierfalen en overlijden.

 

gentaur.be
gentaur.be

Het spike-eiwit (S) is een envelopverankerd eiwit dat de herkenning en binding van SARS-CoV-2 aan gastheercellen medieert. S kan verder worden gesplitst door het protease van de gastheer in twee subeenheden genaamd S1 en S2. S1-polypeptide bevat een receptorbindend domein (S1RBD) dat cruciaal is voor de specifieke herkenning en interactie met de menselijke receptor ACE2, wat de eerste en de meest essentiële stap is voor de virusinfectie.

Assayprincipe

ImmunoDiagnostics SARS-CoV-2 S1RBD IgG ELISA-kit is een tweestaps

incubatie-immunoassay-kit. Recombinant spike-eiwit S1-receptor-bindend domein (S1RBD) van SARS-CoV-2 dat vooraf op de polystyreen microwell-strips is gecoat, kan specifiek

anti-S1RBD-antilichamen in humaan serum of plasmamonster herkennen. Na een incubatie van 1 uur worden anti-S1RBD-antilichamen opgevangen door geïmmobiliseerd S1RBD-eiwit terwijl de ongebonden componenten worden weggespoeld. Daarna wordt een detectieoplossing die

HRP-geconjugeerd anti-humaan IgG bevat toegevoegd voor nog een incubatie van 1 uur, waarbij HRP-geconjugeerd anti-humaan IgG bindt aan de IgG-klasse-antilichamen die eerder aan het S1RBD-eiwit op de plaat waren gebonden. Na het verwijderen van niet-specifieke bindingen wordt een HRP-substraatoplossing toegevoegd die 3,3 ′, 5,5 ′ -tetramethylbenzidine (TMB) bevat, wat resulteert in de vorming van een blauwe kleur. 2 ZO 4, het transformeren van de blauwe kleur naar gele signalen, die wordt gekwantificeerd door een absorptie-microtiterplaatlezer bij 450 nm. De kleurintensiteit is evenredig met de hoeveelheid antilichamen tegen S1RBP die in de putjes zijn gevangen.

MEEGELEVERDE REAGENTIA EN MATERIALEN

 

 

 

 

EEN

 

 

SARS-CoV-2

S1RBD gecoate ELISA-plaat

12 strips van 8 wells (96 wells in totaal) in een witte striphouder en verzegeld in een foliezakje met droogmiddel. Elk putje bevat recombinant S1RBD van SARS-CoV-2. De microwell-strips kunnen afzonderlijk worden gebruikt. Plaats ongebruikte putten of strips in de meegeleverde afsluitbare plastic opslag

 

zak samen met het droogmiddel en

gentaur.be
gentaur.be

 

keer terug naar 2-8 ° C. Eenmaal geopend, stabiel gedurende 4 weken bij 2-8 ° C.
B 5x assaybuffer 1 x 20 ml
C 10x wasbuffer 1 x 40 ml
 

D

100x

detectie-antilichaamoplossin

1 x 0,12 ml

g

E Substraat oplossing 1 x 12 ml
F Stop oplossing 1 x 12 ml
G Blanco controle 1 x 1 ml
 

H

Positieve controle

 

(anti-S1RBD IgG)

 

1 injectieflacon

 

MATERIALEN VEREIST, MAAR NIET MEEGELEVERD

·        Pipetten en pipetpunten.

  • 96-wells plaat of handmatige

·        Buffer- en reagensreservoirs.

  • Papieren handdoeken of absorberend
  • Een microplaatlezer die het absorptievermogen bij 450 nm kan
  • Gedestilleerd water of gedeïoniseerd

OPSLAG EN BEREIDING VAN TESTSTALEN

  • Er wordt gesuggereerd dat testmonsters onmiddellijk na scheiding van serum of plasma worden geanalyseerd of bij voorkeur bevroren worden bewaard (-20 0 C ofhieronder) in aliquots. Meerdere cycli van invriezen en ontdooien moeten worden vermeden. Dubbele test wordt aanbevolen.
  • Serum- of plasmamonsters met EDTA, natriumcitraat of heparine kunnen wordenSterk lipemische, icterische of hemolytische monsters worden niet aanbevolen. Monsters met zichtbare microbiële besmetting mogen niet worden gebruikt.
  • Indien nodig, vortex-testserum of plasmamonsters bij kamertemperatuur om homogeniteit te garanderen. Centrifugeer vervolgens monsters bij10.000 tot 15.000 tpm gedurende 5 minuten voorafgaand aan de assay om deeltjes te verwijderen. Sla deze centrifugatiestap niet over als de monsters troebel zijn en deeltjes bevatten.

 

gentaur.be
gentaur.be

OPSLAG EN STABILITEIT

  • De kit is alleen stabiel tot de vervaldatum indien bewaard bij 2-8 ° C in verzegelde De vervaldatum is de laatste dag van de maand die staat vermeld op het foliezakje en de kitcontainer.
  • De kit moet bij ontvangst bij 2-8 ° C worden bewaard en alle reagentia moeten vóór gebruik op kamertemperatuur worden gebracht. Verwijder alle ongebruikte stroken met antigeencoating van de microtiterplaat, doe ze terug in het foliezakje en sluit opnieuw af. Eenmaal geopend, kunnen de strips maximaal een maand bij 2-8 ° C worden bewaard. Bescherm de reagentia tijdens opslag tegen verontreiniging met micro-organismen of chemicaliën om maximale prestaties te garanderen.
  • Bewaar de positieve controle bij 4 graden, tot 3

BEREIDING VAN MEEGELEVERDE REAGENTIA

  1. 1 ×Bereid
    1x assaybuffer door de 5x assaybuffer (20 ml) te mengen met 80 ml gedestilleerd water of gedeïoniseerd water. 【 VOORZICHTIGHEID!!! 】 Als er neerslagen worden waargenomen in de 5x assay-bufferfles, verwarm de fles dan in een waterbad van 37 ° C totdat de neerslagen verdwijnen. Een onvolledige oplossing leidt tot een hoge achtergrond. De 1x assay-buffer kan maximaal een maand bij 2-8 ° C worden bewaard.
  1. 1xWash-buffer

Bereid 1xWash-buffer door de 10xWash-buffer (40ml) te mengen met 360ml gedestilleerd water of gedeïoniseerd water. VOORZICHTIGHEID!!! Als er neerslag wordt waargenomen in de 10xWash-bufferfles, verwarm dan de fles in een waterbatch van 37 ° C totdat de neerslag verdwijnt. Een onvolledige oplossing leidt tot een hoge achtergrond. De 1xWash-buffer kan maximaal een maand bij 2-8 ° C worden bewaard.

  1. 1x detectie-antilichaamoplossing

Draai de 100 × detectie-antilichaamoplossing kort neer en verdun de gewenste hoeveelheid antilichaam 1: 100 met 1 × assaybuffer, 100 m 1 putje van de 1 × detectie-antilichaamoplossing is vereist per putje. Bereid slechts zoveel 1 × detectie-antilichaamoplossing als nodig is. Lever de … In 100 × detectie-antilichaamoplossing tot 2-8 ° C onmiddellijk nadat het benodigde volume is verwijderd.

  1. Voorbereiding van positieve controle
gentaur.be
gentaur.be

Centrifugeer het kort voordat u de buis opent . Voeg 200 µl 1xAssay-buffer toe aan elke buis en meng goed.

MONSTERVOORBEREIDING

Serum- of plasmamonster is over het algemeen vereist een 100-voudige verdunning in de 1 × assaybuffer. Een voorgestelde verdunningsstap is om 10 µl monster toe te voegen aan 990 µl 1 × assaybuffer. De verdunningsfactor kan worden aangepast op basis van de titer van de antilichamen in de monsters