PROTEINASE K Moleculaire Biologie Grade

Abstract

Infectieuze eiwitten (prionen) worden ironisch genoeg gedefinieerd door hun weerstand tegen proteolytische vertering. Een kenmerk van de overdraagbare isovorm van het prioneiwit (PrP ^Sc ) is de partiële resistentie tegen K (PK) digestie proteïnase. Diagnose van prionziekte berust typisch op immunodetectie van PK-gedigereerd PrP ^Sc door Western blot, ELISA of immunohistochemische detectie. PK-digestie is ook gebruikt om verschillen in prionstammen te detecteren. PK is dus een cruciaal hulpmiddel geweest om de verspreiding van prionen te detecteren en daardoor te beheersen.

PK is ook gebruikt als een hulpmiddel om de structuur van PrP te onderzoeken. Massaspectrometrie en antilichamen zijn gebruikt voor PK splitsingsplaatsen in PrP identificeren ^Sc . Deze resultaten werden gebruikt om het toegankelijker, flexibeler strekt aansluiten van de β-streng componenten identificeren PrP ^Sc . Deze gegevens, gecombineerd met fysieke beperkingen opgelegd door spectroscopische resultaten werden gebruikt om een kwalitatieve model voor de structuur van PrP stellen ^Sc . Ervan uitgaande dat PrP ^Sc een viertraps -solenoïde is, hebben we de PrP-sequentie van schroefdraad voorzien om te voldoen aan de PK-proteolysegegevens en andere experimentele beperkingen.

Biologische producten, zoals therapeutische eiwitten, monoklonale antilichamen, vaccins en producten voor cel- en gentherapie zijn steeds belangrijker geworden. In tegenstelling tot traditionele chemisch gesynthetiseerde geneesmiddelen die inwerken op een hydrofobe pocket van een eiwit om een kinase-route te activeren of te remmen, is de farmacologische werking van biotherapeutica via binding aan het doelwit of immunomodulatie.

Proteinase K, recombinant

Vanwege de complexe aard van biologische producten, worden wetenschappers geconfronteerd met meerdere uitdagingen, van vroege ontdekking van geneesmiddelen tot ontwikkeling. Bijvoorbeeld tijdens identificatie van een kloon met de gewenste immunogeniciteit die bindingsspecificiteit aan het doelwit kan aantonen en daaropvolgende modulatie of het opwekken van de gewenste immuunrespons, en verder tijdens kloonkarakterisering, opschaling en productie van deze producten.

Van ontdekking tot productie, het gebruik van geneesmiddelen met grote moleculen om veilige en effectieve therapieën te creëren, is complex en duur. PerkinElmer stelt wetenschappers in staat om hun gehele biologische workflow te ontwikkelen en te stroomlijnen, zodat ze deze uitdagingen kunnen overwinnen en consistente, hoogwaardige biologische geneesmiddelen sneller op de markt kunnen brengen.

Tijdens de vroege stadia van medicijnontdekking is het van cruciaal belang om de doelbiologie, het werkingsmechanisme (MoA) te begrijpen met behulp van de meest nauwkeurige instrumenten, waaronder automatisering en software om complexe workflows te vereenvoudigen, van kloonselectie en expressie tot lead discovery en screening.

Versnel uw biomoleculaire ontdekking door een combinatie van in vitro en in vivo technieken te gebruiken in combinatie met krachtige software die gegevens omzet in inzichten.

Cellulaire beeldvorming voor in vitro doelvalidatie
In vivo beeldvorming voor het ontdekken van doelen
Zeer interactieve visualisatie die de snelle isolatie van verbindingen mogelijk maakt op basis van belangrijke criteria voor verdere analyse
In silico

Thermo Scientific Proteinase K is een endolytisch protease met een breed bereik dat veel wordt gebruikt voor de vertering van eiwitten in nucleïnezuurpreparaten. Het breekt eiwitten af, zelfs in de aanwezigheid van detergentia. Proteïnase K splitst peptidebindingen aan de carboxylzijden van alifatische, aromatische of hydrofobe aminozuren. De Proteinase K is geclassificeerd als een serineprotease. Het kleinste peptide dat door dit enzym moet worden gehydrolyseerd, is een tetrapeptide.

Highlights

• Kant-en-klare oplossing
• Actief in een breed scala aan reactieomstandigheden

Toepassingen

• Isolatie van genomisch DNA uit muizenstaart
• Isolatie van genomisch DNA uit gekweekte cellen
• Verwijdering van DNasen en RNasen bij het isoleren van DNA en RNA uit weefsels of cellijnen
• Bepaling van enzymlokalisatie
• Verbetering van de kloneringsefficiëntie van PCR-producten

Opmerking

• De aanbevolen werkconcentratie van proteïnase K is 0,05 tot 1 mg/ml. De activiteit van het enzym wordt gestimuleerd door 0,2 tot 1% SDS of door 1 tot 4 M ureum
• Ca2+ beschermt Proteïnase K tegen autolyse, verhoogt de thermische stabiliteit en heeft een regulerende functie voor de substraatbindingsplaats van Proteïnase K
• Stabiel over een breed pH-bereik: 4,0 tot 12,5, optimale pH 7,5 tot 8,0
• Optimale activiteit bij 50 tot 55 °C
• Snelle denaturatie van enzym treedt op bij temperaturen boven 65°C

[Linking template=”default” type=”products” search=”PROTEINASE K” header=”2″ limit=”28″ start=”2″ showCatalogNumber=”true” showSize=”true” showSupplier=”true” showPrice=”true” showDescription=”true” showAdditionalInformation=”true” showImage=”true” showSchemaMarkup=”true” imageWidth=”” imageHeight=””]