Lab advies

Contents

Accessoires

  1. Alexa Fluor 647, ATTO488
  2. Antilichamen: IgGs
  3. Antilichamen: Nanobodies / VHHs

Contacter ons voor de volgende vragen

  1. Are Chromobodies constitutively expressed?Are Chromobodies fluorogenic or do they only emit fluorescence when bound to a target?

    Are Nano-Booster and Nano-Labels applicable for live-cell imaging?
    Are Nano-Labels applicable for live-cell imaging?
    Are the Nanobodies monoclonal or polyclonal?

  2. ATTO488/594
  3. ATTO647N, Abberior STAR 635P

Bindt de GFP-Trap TurboGFP?
Bindt de Myc-Trap endogene c-Myc eiwit?

Moleculaire Biologie vragen

Can I amplify the Chromobody plasmid in bacteria?
Can I do a simultaneous co-staining with two or more Nano-Boosters and Nano-Labels?
Can I do IF in yeast with Nano-Boosters?
Can I do two-color super-resolution microscopy combining GFP- and RFP-Boosters?
Can I recover the beads from the spin column?
Can I use the HA-tag antibody [7C9] for immunoprecipitation?
Can I use the Myc-tag antibody [9E1] for immunoprecipitation?

Wat is thet verschil tussen Phage display antibodies en  Camel Chromobodies?

De GFP-Trap heeft een iets hogere affiniteit voor C-terminal GFP-fusies. U dit compenseren door een langwerpige incubatietijd (1-2 uur in plaats van 15-30 min).®
Do Chromobodies only work in live cells?
Do Nano-Boosters and Nano-Labels penetrate though the cell membranes of live cells?
Do Nano-Boosters work on (methanol-) fixed samples?
Do the Chromobodies diffuse through the cell membrane into growth medium?
Do the Nanobodies have any tags?
Does the GFP VHH bind to protein A or protein G?
Does the Myc-tag antibody [9E1] bind endogenous c-Myc protein?
Does the RFP-Booster recognize tdTomato?

FAQ on Antibodies: IgGs
FAQ on Antibodies: Nanobodies / VHHs
FAQ on Chromobodies
FAQ on Nano-Boosters and Nano-Labels

Hoe kan ik mijn Spot-fusion detecteren in western blot applicatie?
Hoe kan ik ontsnaperen gebonden eiwitten uit een val in hun eigen staat?
Hoe kan ik vastkomen spot-tagged eiwit uit de Spot-Trap in zijn eigen staat?
Hoe kan ik voorkomen dat niet-specifieke eiwitinteracties zich binden aan de val?
Hoe kan ik voorzichtig uittong en inheemse Myc-gelabelde eiwitten uit de Myc-Trap?
Hoe lang moet ik mijn Spot-fusion sample uitbroeden met Spot-Label voor Western blot en IF-toepassingen?
Hoeveel celextract moet ik gebruiken voor een immunoneerslagreactie?
Hoeveel zoogdiercellen zijn er nodig voor een immunoneerslagreactie?
How many dye molecules are coupled to Nano-Boosters and Nano-Labels?
Is er een verschil in binding wanneer ik gebruik maken van de N-terminal vs C-terminal GFP-fusion?
Is het mogelijk om gebonden eiwitten uit GFP-Trap ® met gratis GFP te ontluchten?
Is it possible to conjugate Nano-Boosters and Nano-Labels to other fluorophores?
Kan ik gfp-gelabelde fusie-eiwitten rechtstreeks uit weefselmonsters zuiveren, d.w.z. in een denatureringsbuffer?
Moet ik 1x Myc- of 2x Myc-peptide gebruiken voor de onthechting van de Myc-Trap?
Moet ik een N-terminal of C-terminal fusion tag gebruiken?
Moet ik een N-terminal of C-terminal Spot-fusions gebruiken? Kan ik de Spot-Tag ook in het midden van mijn eiwit plaatsen?
Moet ik gebonden eiwitten uit de kralen ontbeelden voor massaspectrometrieanalyse?

Moet ik mijn eiwit van belang uit de kralen voor enzymatische testen loste?

 

  1. NanobodyGFP-immunoneerslagmCherry/ RFP pulldownmicroscopie met superresolutie massaspec
  2. Secundaire Nanobodies
  3. Spot-taggevalideerde antilichamenGFP kralen
  4. IP van myc-gelabelde eiwittenLive Cell Imaging
    Nano-Boosters and Nano-Labels are highly suitable for Super-Resolution Microscopy. Due to their small size (2-3 nm), they minimize the linkage error and provide a more precise and dense staining, than conventional antibodies (15 nm linear dimension. The selection of a Nano-Booster and Nano-Label conjugate depends on your microscope setup and lasers.

We recommend for:

Nano-Boosters en Nano-Labels
Nano-Traps
Should I preclear my sample when using GFP-Trap Dynabeads?
Specificaties van GFP-Trap Agarose, Magnetic Agarose en Dynabeads
The Nanobodies are recombinant/monoclonal.

Veelgestelde vragen over Nano-Traps

Wat is de bindende capaciteit van de GFP-Trap®?
Wat zijn de biofysische parameters van de GFP-Trap®?
Wat zijn de biofysische parameters van de RFP-Trap®?
Wat zijn de dissociatieconstanten van de Nano-Traps?
We could not detect binding of the Myc-tag antibody [9E1] to endogenous c-Myc protein. Some epitope residues that have shown to be crucial for binding to the Myc-tag antibody are buried in the three-dimensional structure of the c-Myc protein. Hence, under native conditions, c-Myc protein is not a suitable binding partner for the Myc-tag antibody [9E1].

What are the biophysical parameters of the VUB Camel Nanobodies?
What is the amount of trap slurry I need for one immunoprecipitation reaction?
What is the protocol for live-cell Nano-Booster and Nano-Label staining of the extracellular fusion protein?
When should I image my cells after transfection with the Chromobody plasmid?

Which Nano-Booster and Nano-Label conjugates are recommended for super-resolution microscopy?
Yes, you can transfer the beads from the spin columns. Add 500 µL buffer to the spin column, pipette up and down and transfer the buffer-bead suspension to a fresh tube. Sediment the beads for 2 min at 2.500x g and room temperature and remove the buffer.

Yes, Chromobody expression is regulated by immediate early promotor CMV. This promotor allows constitutive Chromobody expression.

Zal het geëlueerde GFP-bindende eiwitkruis reageren met een secundairIg specifiek antilichaam?

Vraag nu uw Selectieaudit

Lieven Gevaert, Bio-ir.