IHC-protocol

Contents

Opnieuw hydrateren van weefselglaasjes:

  1. Label de weefselglaasjes volgens het protocol en schik ze goed in dia-rekken.
  2. Bak de objectglaasjes in een oven op 60 ° C gedurende 15 minuten of tot de paraffine op het weefsel loslaat en druppels vormt.
  3. Deparaffinize en rehydrateer weefselcoupes door dia’s onder te dompelen in de volgende reeks oplossingen.
    Schuif Brite 3 wisselingen, elk 5 minuten. (Slide Brite is een xyleenvervanger)
    100% ethanol, 2 verversingen elk
    95% ethanol, 2 verversingen elk 5 minuten
    80% ethanol, 5 minuten
    50% ethanol, 5 minuten
    gedestilleerd water, 2
    verversingen elk 5 minuten waterstofperoxide 3%, 2 wisselt elk 5 minuten.

Ophalen van antigeen:

  • Antigeen ophalen met behulp van BioCare’s Decloacker. Kook secties bij 95 ° C gedurende 45 minuten met Tris-EDTA (10 mM Tris met 1 mM EDTA, pH9,0) OF citraatbuffer (10 mM citraat pH6,0).

Verwijder na het ophalen van het antigeen de objectglaasjes uit de decloaker en laat ze 20 minuten afkoelen.Het spoelen van dia’s in kraanwater is prima voor deze stap. Opmerkingen: water in decloaker moet dagelijks worden ververst. De hoeveelheid water moet 500 ml zijn volgens de handleiding van de apparatuur.

Immunohistochemie

formalin
formol

  1. Gebruik een hydrofobe marker om een ​​barrière te creëren boven en onder weefselcoupes. Bij deze stap moet voorzichtigheid worden betracht, omdat de markering soms het weefsel kan uitdrogen als de markering zich dicht bij het weefsel bevindt. Vermijd dus nauwe markering in deze stap.
  2. Was sectie tweemaal, 3 keer elk in PBS.
  3. Incubeer het primaire antilichaam gedurende 30 minuten.
  4. Was secties tweemaal met PBS, elk 3-5 minuten.
  5. Incubeer gedurende 30 minuten met secundair antilichaam, geit-anti-muis / geit-anti-konijn-HRP-polymeer.
  6. DAB 3 tot 5 minuten Bereiding van DAB: neem 950 µl DAB-substraat en voeg 500 µl DAB-chromogeen toe (ScyTek Laboratories). Goed mengen en direct gebruiken.
  7. Was secties met PBS gedurende 3-5 minuten, de laatste wasbeurt moet DW zijn.
  8. Kleuring met hematoxyline- en blauwingsoplossingen Dompel het objectglaasje 3-5 keer in hematoxyline en was de objectglaasjes 3 keer in leidingwater. Dompel de objectglaasjes in blauwing-oplossingen en was de objectglaasjes 3 keer in leidingwater.
  9. Observeer cellen onder een microscoop en ontdek de cellulaire lokalisatie in weefsels.