Detectieoplossing die HRP-geconjugeerd antihuman-IgM bevat

BEREIDING VAN MEEGELEVERDE REAGENTIA

1.   1 × assaybuffer.

Bereid 1x assaybuffer door de 5x assaybuffer (20 ml) te mengen met 80 ml gedestilleerd water of gedeïoniseerd water. VOORZICHTIGHEID!!!Als er neerslagen worden waargenomen in de 5x assaybufferfles,verwarm de fles in een waterbad van 37 ° C tot de neerslag verdwijnt. Onvolledige ontbinding zal leiden tot een hoge achtergrond. De 1x assay-buffer kan maximaal een maand bij 2-8 ° C worden bewaard.

2.   1xWash-buffer

Bereid 1xWash-buffer door de 10xWash-buffer (40ml) te mengen met 360ml gedestilleerd water of gedeïoniseerd water. 【 VOORZICHTIGHEID!!!】 Als er neerslagen worden waargenomen in de 10xWash-bufferfles,verwarm de fles in een partij water van 37 ° C totdat de neerslag verdwijnt. Een onvolledige oplossing leidt tot een hoge achtergrond. De 1xWash-buffer kan maximaal een maand bij 2-8 ° C worden bewaard.

  1. 1x detectie-antilichaamoplossing
gentaur.be
gentaur.be

 

 

Draai de 100 × detectie-antilichaamoplossing kort neer en verdun de gewenste hoeveelheid antilichaam 1: 100 met 1 × assaybuffer, 100 m 1 putje van de 1 × detectie-antilichaamoplossing is vereist per putje.

Bereid slechts zoveel 1 × detectie-antilichaamoplossing als nodig is. Breng de 100 × detectie-antilichaamoplossing onmiddellijk terug

naar 2-8 ° C nadat het benodigde volume is verwijderd.

MONSTERVOORBEREIDING

Serum- of plasmamonster is over het algemeen vereist een 100-voudige verdunning in de 1 × assaybuffer. Een voorgestelde verdunningsstap is om 10 µl monster toe te voegen aan 990 µl 1 × assaybuffer.

ASSAYPROCEDURES

Stel alle reagentia vóór gebruik ten minste 30 minuten op kamertemperatuur (20-25 ° C).

 

 

 

Stap 1

Negatieve controle, testmonster en blanco toevoegen:

Voeg 50 μl negatieve controle, 100 μl testmonster en 100 μl 1 x assaybuffer als blanco toe aan hun respectievelijke wells. Drievoudige test wordt aanbevolen voor negatieve controle en dubbele test wordt aanbevolen voor blanco en testmonsters.

 

Opmerking: Gebruik voor elk testmonster, negatieve controle en blanco een afzonderlijke wegwerppipetpunt om kruisbesmetting te voorkomen. Meng door zachtjes op de plaat te tikken.

Stap 2 Incubatie:

Bedek de plaat en incubeer gedurende 1 uur bij kamertemperatuur.

 

 

Stap 3

Wassen:

Gooi de inhoud weg en tik op de plaat op een schone papieren handdoek om de resterende oplossing in elk putje te verwijderen. Voeg 300 µl 1 × wasbuffer toe aan elk putje en incubeer gedurende 1 minuut. Gooi de 1 × wasbuffer weg en tik op de plaat op een schone papieren handdoek om de resterende wasbuffer te verwijderen. Herhaal de wasstap voor in totaal 3 wasbeurten.

Stap 4 HRP-geconjugeerde detectieoplossing toevoegen:

Voeg aan elk putje 100 µl 1 × detectieoplossing toe.

Stap 5 Incubatie:

Bedek de plaat en incubeer gedurende 1 uur bij kamertemperatuur.

Stap 6 Wassen:

Was elk putje 4 keer zoals beschreven in stap 3.

 

Stap 7

Kleur:

Voeg 100 µl substraatoplossing toe aan elk putje en incubeer gedurende 15 minuten bij

kamertemperatuur. Bescherm tegen licht.

 

Stap 8

Reactie stoppen:

Voeg 100 µl stopoplossing toe aan elk putje en tik zachtjes gedurende enkele seconden op het plaatframe om een

grondige menging te garanderen.

 

Stap 9

Meting:

Meet onmiddellijk de absorptie van elk putje bij 450 nm. Let op: lees de absorptie binnen 10

minuten na het stoppen van de reactie.

 

gentaur.be
gentaur.be

VOORBEELDREGELING VAN DE AFGIFTE VAN CONTROLES / SPECIMENS:

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
EEN Blank Voorbeeld 2
B Blank Voorbeeld 3
C Neg. Voorbeeld 3
D Neg.
E Neg.
F Voorbeeld1… G
Monster1 H
Voorbeeld 2

KWALITEITSCONTROLE

Elke microtiterplaat moet afzonderlijk worden overwogen bij het berekenen en interpreteren van de resultaten van de assay, ongeacht het aantal gelijktijdig verwerkte platen. De resultaten worden berekend door de absorptiewaarde van elk monster te relateren aan de afkapwaarde.

De testresultaten zijn geldig als aan de criteria voor kwaliteitscontrole is voldaan. Het wordt aanbevolen dat elk laboratorium een geschikt systeem voor kwaliteitscontrole instelt met materiaal voor kwaliteitscontrole dat vergelijkbaar is met of identiek is aan het te analyseren patiëntspecimen.

– De absorptiewaarde van de negatieve controle moet <0,200 bij 450 nm zijn.

TYPISCHE RESULTATEN (alleen voorbeelden)

 

Monsters OD450
 

Negatieve controle

0.113
0.098
0.121
 

Serum van gezonde proefpersonen

0,127
0.154
0,097
Serum van COVID-19

patiënten

1.052
0,38
0.242

 

gentaur.be
gentaur.be

CUT-OFF WAARDE

Absorptie 450nm Indicatie
<0,20 Negatief
³ 0,20 Positief

Deze afkapwaarde is gevalideerd in ImmunoDiagnostics, maar het wordt ten zeerste aanbevolen dat elk laboratorium zijn eigen normale en pathologische referentiebereik voor anti-NP IgM-antilichamen vaststelt. Bovendien wordt ook aanbevolen dat elk laboratorium zijn eigen panel controlemonsters in de assay opneemt.

PRESTATIEKENMERKEN

 

Detectiesnelheid 88,23% (n = 68)
Specificiteit 92% (n = 100)
Inter-assay precisie
Monsters CV
1 7,16%
2 5,35%
3 6,19%
Intra assay precisie
Monsters CV
1 4,93%
2 6,77%
3 5,89%

 

Klinische validatiestudie van ImmunoDiagnostics SARS-CoV-2 NP IgM ELISA werd uitgevoerd in 2020 in Shenzhen, China. Monsters werden verzameld uit door COVID-19 bevestigde gevallen met klinische symptomen, laboratoriumafwijkingen of manifestaties van pulmonale beeldvorming.

Er zijn geen tests uitgevoerd op monsters van latente infecties of patiënten tijdens de incubatieperiode, daarom moet bij de interpretatie van de testresultaten rekening worden gehouden met de verzameltijd van het monster. Voor de IgM-test werden 68 patiëntmonsters met een ziekteduur van minder dan 2 maanden getest.

INTERPRETATIES VAN DE RESULTATEN

Negatief resultaat (absorptie / cut-off van het monster ≦ 0.9):

  • Het testresultaat is negatief wanneer de verhouding tussen de absorptie van het monster en de afkapwaarde gelijk is aan of kleiner is dan 0,9. Een negatief resultaat geeft aan dat er geen SARS-CoV-2 NP-antilichamen zijn gedetecteerd met ImmunoDiagnostics SARS-CoV-2 NP IgM ELISA, daarom momenteel geen serologische indicatie van COVID-19.Positief resultaat (absorptie / cut-off van het monster ≧ 1.1):
  • Het testresultaat is positief wanneer de verhouding tussen de absorptie van het monster en de afkapwaarde gelijk is aan of groter is dan 1,1. Positief resultaat geeft aan dat SARS-CoV-2 NP-antilichamen zijn gedetecteerd met behulp van ImmunoDiagnostics SARS-CoV-2 NP IgM ELISA en dat ze kunnen worden gebruikt als serologische indicaties van COVID-19 op het moment vanBorderline-resultaat (absorptie / cut-off van monster = 0,9-1,1):
  • Het testresultaat wordt als grensresultaat beschouwd wanneer de verhouding tussen de absorptie van het monster en de afkapwaarde tussen 0,9 en 1,1 ligt. Monsters met grensresultaten zijn op het moment van testen niet te interpreteren. Het wordt sterk aanbevolen om vóór de diagnose andere klinische en laboratoriumgegevens te integreren, aangezien de klinische diagnose niet mag worden vastgesteld op basis van slechts één soort

BEPERKINGEN

  1. Positieve resultaten moeten worden bevestigd met een andere beschikbare methode en geïnterpreteerd in combinatie met de klinische informatie van de patiënt.
  2. Antilichamen zijn mogelijk niet detecteerbaar in het vroege stadium van de ziekte en bij sommige individuen met Daarom zijn negatieve resultaten verkregen met ImmunoDiagnostics SARS-CoV-2 NP IgM ELISA slechts een indicatie dat het specimen geen detecteerbaar niveau van antilichamen bevat en mag een negatief resultaat niet worden beschouwd als overtuigend bewijs dat het individu niet is geïnfecteerd met het virus.
  1. Er kunnen vals-positieve resultaten optreden vanwege de verschillende redenen, waarvan de meeste verband houden met, maar niet beperkt zijn tot een ontoereikende wasstap. Neem voor meer informatie over ImmunoDiagnostics ELISA-probleemoplossing contact op met de technische ondersteuning van mmunoDiagnostics voor verdere
  2. De meest voorkomende assayfouten zijn het gebruik van kits na de vervaldatum, slechte wasprocedures, gecontamineerde reagentia, onjuiste assayprocedures, onvoldoende aspiratie tijdens het wassen, het niet toevoegen van monsters of reagentia, onjuiste werking met laboratoriumapparatuur, timingfouten, de gebruik van sterk gehemolyseerde specimens of specimens die fibrine bevatten, onvolledig geklonterde
  1. De prevalentie van de marker heeft invloed op de voorspellende waarden van de
  2. Deze assay kan niet worden gebruikt om gepoold (gemengd) serum of plasma te De kit is alleen beoordeeld met individuele serum- of plasmamonsters.
  3. ImmunoDiagnostics SARS-CoV-2 NP IgM ELISA is een kwalitatieve assay en de resultaten kunnen niet worden gebruikt om de antilichaamconcentratie te

 

gentaur.be
gentaur.be

 

 

SYMBOLEN

Fabrikant EG-conformiteitsverklaring
Vervaldatum Raadpleeg instructie
Lotnummer  

Op te slaan

 

Catalogus nummer

 

Voorzichtigheid

In vitro Diagnostisch apparaat Bio gevaar
Negatieve controle

 

VEILIGHEIDSOVERWEGINGEN

Streptavidin Peroxidase (SA-POD)

Signaalwoord: Waarschuwing Gevarenaanduiding (en)

H317: Kan een allergische huidreactie veroorzaken Veiligheidsaanbeveling (en) P280: Beschermende handschoenen / beschermende kleding / oogbescherming / gelaatsbescherming dragen