Cell Cultuur

probleem mogelijke reden Voorgestelde oplossing
De pH van de kweekvloeistof verandert te snel

 

De CO 2 -spanning klopt niet.

 

 

 

De dop van de kweekfles is te strak.

Het buffervermogen van het NaHCO 3- buffersysteem is onvoldoende.

Onjuiste zoutconcentratie in kweek

 

 

Besmetting met bacteriën, gisten of schimmels

( 1 ) Verhoog of verlaag de CO 2 -concentratie in de incubator volgens de concentratie NaHCO 3 in de kweekoplossing ,2,0 g/ L tot3,7 g/ L concentratie van NaHC03 . 3 komt overeen met de CO2- concentratie . 5 % tot 10 %.

( 2 ) Schakel over op een kweekmedium dat niet afhankelijk is van CO 2 .

Draai de dop 1/4 draai.

Voeg HEPES- buffer toe aan 10 tot25 mMEindconcentratie .

In CO. IS 2 inschakelen van het kweekmilieu van Earle ‘ S bouillon zout bereid, gekweekt in het kweekmilieu in de atmosfeer plaats Hanks bereide bouillon zout.

Gooi de cultuur weg.

Of steriliseren met antibiotica.

 

De kweekoplossing is neergeslagen, maar de pH- waarde verandert niet Na het wassen met wasmiddel zal het resterende fosfaat de mediumcomponenten neerslaan

Cryopreservatiemedium

Spoel glaswerk herhaaldelijk af met gedeïoniseerd water en steriliseer het daarna.

 

Verwarm het kweekmedium tot37 ℃, Schud het om op te lossen als het neerslag nog steeds bestaat, gooi de kweekoplossing weg.

De kweekoplossing is neergeslagen en tegelijkertijd verandert de pH Bacteriële of schimmelbesmetting Gooi de cultuur weg.

Of steriliseren met antibiotica.

 

Gekweekte cellen zijn niet aanhankelijk Overdigestie van trypsine

Mycoplasma-besmetting

Geen adhesiefactoren in het kweekmedium

Verkort de verteringstijd van trypsine of verlaag de trypsineconcentratie.

Scheid de cultuur en detecteer mycoplasma. Maak de standaard en de broedmachine schoon. Als er besmetting met mycoplasma wordt gevonden, gooi de cultuur dan weg.

Opgeschorte celclusters Het kweekmedium bevat calcium- en magnesiumionen

 

Mycoplasma-besmetting

 

Overmatige protease-vertering zorgt ervoor dat cellysis DNA vrijgeeft

Was de cellen met calcium-magnesiumvrije uitgebalanceerde zoutoplossing en pipetteer de cellen voorzichtig om een ​​enkele celsuspensie te verkrijgen.

Scheid de cultuur en detecteer mycoplasma. Als er besmetting met mycoplasma wordt gevonden, gooi de cultuur dan weg.

De cellen werden behandeld met DNase I.

Primaire celcultuurverontreiniging Het primaire kweekweefsel was besmet voordat het de kweek binnenging Was de weefsels herhaaldelijk met een uitgebalanceerde zoutoplossing met hoge concentraties antibiotica voor incubatie.
Langzame groei van gekweekte cellen Vanwege het veranderen van verschillende kweekmedia of serum

 

 

Sommige essentiële componenten voor celgroei zoals glutamine of groeifactoren in de kweekvloeistof zijn uitgeput of ontbreken of zijn vernietigd.

Een kleine hoeveelheid bacteriële of schimmelbesmetting in de cultuur

Onjuiste opslag van reagentia

 

 

De beginconcentratie van geïnoculeerde cellen is te laag

Cellen verouderen

Mycoplasma-besmetting

Vergelijk de samenstelling van het nieuwe medium met het oorspronkelijke medium en vergelijk het nieuwe serum met het oude serum om celgroei-experimenten te ondersteunen.

Verhoog de initiële celconcentratie in kweek.

Laat de cellen zich geleidelijk aanpassen aan het nieuwe medium.

Vervang door vers bereid kweekmedium.

Voeg glutamine of groeifactoren toe.

Incubeer met antibioticavrij medium. Gooi de cultuur weg als er besmetting wordt gevonden. Of steriliseren met antibiotica.

Serum moet worden bewaard in-5 ℃ Naar-20 ℃. Het kweekmedium moet in 2 -8 ℃Verwijderd houden van licht. Compleet kweekmedium met serum in 2-8 ℃Bewaar het en gebruik het binnen 2 weken.

Verhoog de beginconcentratie van geïnoculeerde cellen.

Vervang door nieuwe bewaarde cellen.

Scheid de cultuur en detecteer mycoplasma. Maak de standaard en de broedmachine schoon. Als er besmetting met mycoplasma wordt gevonden, gooi de cultuur dan weg.

Gekweekte celdood Geen CO 2 in de incubator

De temperatuur in de broedmachine schommelt te veel

Schade aan cellen tijdens bevriezing of reanimatie

Onjuiste gemiddelde osmotische druk

 

 

 

Accumulatie van toxische metabolieten in kweekvloeistof

CO 2 detectie in de incubator

Controleer de temperatuur in de broedmachine

Koop nieuwe bewaarde celsoorten

Detecteer de osmotische druk van de kweekoplossing. Opmerking: de meeste zoogdiercellen kunnen een osmotische druk van 260-350 mOsm / kg verdragen . Het toevoegen van extra reagentia zoals HEPES of medicijnen kan de osmotische druk van het kweekmedium beïnvloeden.

 

Verander in vers kweekmedium