Western Blot

Western blot-protocol

Benodigde producten:

Primaire antilichamen
Secundaire antilichamen
Loopbuffer: H2O, Tris-Glycine , SDS
Overdrachtsbuffer: H2O, Tris-Glycine , EtOH / MeOH, SDS
Acrylamide-gels: H2O, Acrylamide , Tris HCl , SDS , APS , TEMED
Voorgegoten gels
Controle gewicht ladders
Laemmli-monsterbuffer
verdunning buffer
Blokkeerbuffer: met of zonder BSA , op basis van caseïne
wassen buffer
Coating buffer
Strippen buffer
Eiwitkleuring : snelle coomassie , real-time kleuring
Membranen: PVDF , nitrocellulose , nylon
Vloeipapier
Western blot-substraten
Rouge Ponceau

Eiwitbereiding en scheiding door gelelektroforese

Verwijder een klein volume eiwitmonster om de eiwitconcentratie te bepalen
Neem 20 µg eiwitten en voeg Laemmli toe
Kook 5 minuten op 95 ° C en draai de buisjes rond
Laad een gelijk volume van eiwitten in de putjes van de SDS-PAGE-gel (acrylamide% hangt af van de grootte van het doeleiwit), en vergeet niet een putje voor controlegewichtladders.
Migratie bij constante stroomsterkte met geschikte buffer

Eiwittransport van de gel naar het membraan

Plaats de sandwich (gel / membraan / vloeipapier) in de transferdoos en zorg ervoor dat er geen luchtbellen in zitten
Overdracht bij constante spanning met de juiste buffer

Antilichaam incubatie en visualisatie

Kleur het membraan met Ponceau-rood om de kwaliteit van de eiwitoverdracht te controleren
Spoel het membraan af en incubeer in een blokkerende oplossing
Incubeer ‘s nachts met het primaire antilichaam bij 4 ° C
Spoel de vlek uit
Incubeer met het secundaire antilichaam 1 uur bij kamertemperatuur
Rincer la membraan
Breng het substraat aan op de vlek

Instant Blue 1L

Promotie 1 Liter  145 Euro InstantBlue 1L (Instant Blue) ISB1L Expedeon 1L bottle EUR 192.00 Zelfde dag geleverd in Benelux Eenstaps gelkleuring in 15 minuten of minder. TM Voordelen Ultrasnelle kleuring – levert resultaten op in 15 minuten of minder. Eenstaps procedure – wassen, fixeren, magnetron of ontkleuren is niet nodig. Haal de gel gewoon uit de …

Instant Blue 1L Read More »

gentaur.be

BEREIDING VAN GELEVERDE REAGENTIA PLAATLEZER

VOORZORGSMAATREGELEN EN VEILIGHEID De ELISA-tests zijn tijd- en temperatuurgevoelig. Om onjuiste resultaten te voorkomen, volgt u strikt de stappen van de testprocedure en wijzigt u deze niet. Wissel geen reagentia uit verschillende partijen uit en gebruik geen reagentia uit andere in de handel verkrijgbare De componenten van de kit zijn nauwkeurig op elkaar afgestemd voor …

BEREIDING VAN GELEVERDE REAGENTIA PLAATLEZER Read More »

PCR LAb

Onze aanbevolen producten

  Elisa kits USCN Life sciences biedt meer dan 5000 Elisa-kits voor analyse van verschillende cytobinls-groeifactoren in serum, plasma, weefselhomogentis, celcysaten, celkweek-supermaten en andere biologische vloeistoffen van mensen, ratten, muizen en andere meer…   Signalway-antilichaam Sab zet zich in voor het leveren van hoogwaardige antilichaamonderzoekstools voor de wereldwijde levenswetenschappelijke onderzoeken. Het ontwikkelt meer dan 4000 clunds …

Onze aanbevolen producten Read More »

Meest voorkomende problemen van de Western-blot-assays.

  De volgende gids dient als checklist voor de mogelijke oorzaken en oplossingen met betrekking tot enkele van de meest voorkomende problemen van de Western-blot-assays. Hoge achtergrond S.No. Mogelijke oorzaak Oplossing 1 Te hoge antilichaamconcentratie Optimaliseer en verlaag de antilichaamconcentratie 2 Vorming van secundaire antilichaamvorming Filtreer het secundaire antilichaam door een filter van 0,2 μm …

Meest voorkomende problemen van de Western-blot-assays. Read More »

MPDU1

Western Blot antibodies to the MPDU1 Gene Rabbit Polyclonals

Scroll to Top