Elisa Genes
ELISA-kits
I. Benodigd materiaal
Reagentia
– Een primaire antilichaamdetectie, specifiek voor het doelmolecuul
– Een recombinant molecuul om als standaard te gebruiken
– Detectieoplossingen: bijv. Streptavidin-HRP en TMB
Buffers
– Blokkeerbuffer: bijv. PBS met 5% BSA
– Wasbuffer: bijv. PBS met 0,05% Tween
– Verdunningsmiddel voor monster en standaard: bijv. PBS 1% BSA
– Stopoplossing: bijv. Verdund H2SO4
Materiaal– Microtiterplaten met 96 putjes die vooraf zijn bekleed met invangantilichaam
– Plaatafdekkingen / verzegelingen
– Pipetten met schaalverdeling van 5 ml en 10 ml
– 20 µl tot 1000 µl instelbare enkelkanaals micropipetten met wegwerptips
– 50 µl tot 300 µl instelbare meerkanalen micropipet met wegwerptips
– Meerkanaals micropipet reservoir
– Bekers, kolven, cilinders die nodig zijn voor de bereiding van reagentia
– Toestel voor afgifte van wasoplossing (meerkanaals wasfles of automatisch wassysteem)
– Microtiterplaatlezer die kan lezen bij 450 nm
II. Experimentele periode
– 3 uur procedure
– 30 minuten verschillende wasbeurten
– 10 minuten lezen
– TOTAAL: 4 uur
III. Procedure
– Voeg 100 µl van de bereide standaard-, monster- en controleverdunningen toe aan geschikte putjes, dek de plaat af en incubeer minimaal 1 uur bij kamertemperatuur.
– Zuig de inhoud van elk putje op en was de plaat vervolgens minstens twee keer met 400 µl wasbuffer in elk putje
– Voeg 100 µl van het verdunde detectie-antilichaam (verdund volgens insert) toe aan elk putje, bedek de plaat en incubeer bij kamertemperatuur gedurende minimaal 1 uur
– Zuig de inhoud van elk putje op en was de plaat daarna minimaal twee keer gebruik 400 µl wasbuffer in elk putje
– Voeg 100 µl van de Streptavidin-HRP-oplossing toe aan alle putjes, bedek de plaat en incubeer gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur
– Zuig de inhoud van elk putje op, en was de plaat daarna minstens twee keer met 400 µl van wasbuffer in elk putje
– Voeg 100 µl van de TMB-oplossing toe aan alle putjes, bedek de plaat en incubeer bij kamertemperatuur gedurende minimaal 10 minuten
Notitie: De incubatietijd van de substraatoplossing wordt meestal bepaald door de prestaties van de ELISA-lezer. Veel ELISA lezers enige record absorptie tot 2,0 OD Daarom is de kleur ontwikkeling binnen de afzonderlijke microputjes moeten worden nageleefd door de analist, en het substraat reactie gestopt voordat positieve putjes zich niet meer binnen opneembare bereik
– Voeg 100 ul van stop-oplossing aan alle putjes en binnen 30 minuten meten de absorptiemetingen bij 450 nm (indien beschikbaar met 620 nm als referentiegolflengte, is 610-650 acceptabel)
-
BEREIDING VAN GELEVERDE REAGENTIA PLAATLEZER
VOORZORGSMAATREGELEN EN VEILIGHEID De ELISA-tests zijn tijd- en temperatuurgevoelig. Om onjuiste resultaten te voorkomen, volgt u strikt de stappen van de testprocedure en wijzigt u deze niet. Wissel geen reagentia…
-
SARS-CoV-2 NP IgG ELISA-kit
BEOOGD GEBRUIK SARS-CoV-2 NP IgG ELISA-kit is een enzymgebonden immunosorbentassay (ELISA) voor de detectie en kwalitatieve meting van IgG-klasse-antilichamen tegen het nucleocapside-eiwit (NP) van het SARS-CoV-2-virus in menselijk bloed. Dit…