Productomschrijving
Het BrdU-celproliferatieassaypakket detecteert 5-broom-2′-deoxyuridine (BrdU) geïntegreerd in mobiel DNA tijdens celproliferatie met behulp van een anti-BrdU-antilichaam. Wanneer cellen worden gekweekt met labelingsmedium dat BrdU bevat, wordt deze pyrimidine-analoog in plaats van thymidine geïntegreerd in het nieuw gesynthetiseerde DNA van prolifererende cellen.
Na het uitroeien van het labelingsmedium worden cellen vastgemaakt en wordt het DNA gedenatureerd met ons fixeer/denaturerende antwoord. Vervolgens wordt een BrdU-muis-mAb toegevoegd om de geïntegreerde BrdU te detecteren (de denaturering van DNA is van cruciaal belang om de toegankelijkheid van de geïntegreerde BrdU voor het detectie-antilichaam te verbeteren). Anti-muis IgG, HRP-gekoppeld antilichaam wordt vervolgens gebruikt om het bepaalde detectie-antilichaam te bevestigen. HRP-substraat TMB wordt toegevoegd om kleur te ontwikkelen. De grootte van de absorptie voor de ontwikkelde kleur is evenredig met de hoeveelheid BrdU die in cellen is geïntegreerd, wat een directe indicatie is van celproliferatie.
| Product bestaat uit: | Bedrag (met Rely) | Antwoordkleur | |||
|---|---|---|---|---|---|
| BrdU | 1 x 150 µl | ||||
| Fixeren/denatureren Antwoord: | 2 x 25 ml | ||||
| BrdU muisdetectie mAb | 1 x 500 µl | Onervaren | |||
| Anti-muis IgG, HRP-gekoppeld antilichaam | 1 x 500 µl | Roze | |||
| Detectie antilichaam verdunningsmiddel | 1 x 50 ml | Onervaren | |||
| HRP-verdunningsmiddel | 1 x 50 ml | Roze | |||
| 20X wasbuffer | 1 x 50 ml | ||||
| TMB-substraat 7004 | 1 x 50 ml | ||||
| STOP Antwoord 7002 | 2 x 25 ml |
Achtergrond
Gehalogeneerde nucleotiden, omdat het pyrimidine-analogon broomdeoxyuridine (BrdU) nuttig is voor het labelen van ontluikend DNA in aanwezige cellen en weefsels. BrdU wordt geïntegreerd in replicerend DNA in plaats van thymidine en daaropvolgende immunodetectie van BrdU met behulp van bepaalde monoklonale antilichamen maakt labeling van cellen in S-deel van de celcyclus mogelijk. Na pulslabeling van cellen of weefsels met bromodeoxyuridine, kan BrdU (Bu20a) Mouse mAb worden gebruikt om BrdU geïntegreerd in enkelstrengs DNA te detecteren.
Belangrijkste opties en bijzonderheden
- Gevoeligheid: 40 cellen/effectief
- Soort patroon: hechtende cellen, suspensiecellen
- Detectietechniek: Colorimetrisch
- Soort assay: Sandwich (kwalitatief)
5-broom-2-deoxyuridine (BrdU) is een pyrimidine-analoog. Het wordt geïntegreerd in het nieuw gesynthetiseerde DNA van prolifererende cellen in plaats van thymidine. Biovision’s BrdU Cell Proliferation Assay Package detecteert geïntegreerde BrdU met behulp van een muis-anti-BrdU-antilichaam. Een anti-muis HRP-gekoppeld secundair antilichaam wordt gebruikt om het anti-BrdU-antilichaam tegen BrdU te detecteren, dat wordt geadopteerd door toevoeging van TMB (een HRP-substraat). De mate van kleurverbetering is evenredig met de hoeveelheid BrdU die in de cellen is geïntegreerd en kan direct worden gebruikt als een indicator van celproliferatie. In vergelijking met verschillende celproliferatie-assays detecteert dit pakket alleen de prolifererende cellen en nooit de gezaaide cellen. Dit uiterst delicate, niet-radioactieve pakket detecteert maar liefst 50-100 prolifererende cellen.
METABOLE PROLIFERATIE ASSAYS
Assays die metabole inspanning meten, zijn geschikt voor het analyseren van proliferatie, levensvatbaarheid en cytotoxiciteit. De verdiscontering van tetrazoliumzouten vergelijkbaar met MTT, XTT en WST-1 tot gekleurde formazanverbindingen of de bioreductie van resazurine gebeurt alleen in metabolisch energetische cellen. Actief prolifererende cellen verbeteren hun metabolische inspanning, terwijl cellen die niet zijn blootgesteld aan toxines, de inspanning kunnen verminderen.
MTT-celproliferatietesten
MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-difenyltetrazoliumbromide; thiazolylblauw) is een in water oplosbaar tetrazoliumzout dat een geelachtig antwoord geeft wanneer het klaar is in media of zoutopties die fenolroze missen. Opgelost MTT wordt omgezet in een onoplosbaar paars formazan door splitsing van de tetrazoliumring door dehydrogenase-enzymen. Dit in water onoplosbare formazan zal worden gesolubiliseerd onder gebruikmaking van isopropanol of verschillende oplosmiddelen, en de opgeloste materialen worden spectrofotometrisch gemeten onder gebruikmaking van de absorptie als een focusbewerking van de getransformeerde kleurstof.
XTT-celproliferatietesten
In tegenstelling tot MTT is het splitsingsproduct van XTT oplosbaar in water; een solubilisatiestap is vervolgens niet vereist. Het tetrazoliumzout XTT wordt gesplitst in formazan door een fraai mobiel mechanisme. Deze bioreductie vindt alleen plaats in levensvatbare cellen en wordt via glycolyse tot NAD(P)H-productie verklaard. De hoeveelheid formazankleurstof die rechtstreeks wordt gevormd, correleert met de verscheidenheid aan metabolisch energetische cellen binnen de traditie.
WST-1 celproliferatietesten
Het stabiele tetrazoliumzout WST-1 wordt gesplitst in een oplosbaar formazan door een fraai mobiel mechanisme dat voornamelijk op de celbodem plaatsvindt. Deze bioreductie is in principe afhankelijk van de glycolytische productie van NAD(P)H in levensvatbare cellen. De hoeveelheid formazankleurstof die rechtstreeks wordt gevormd, correleert met de verscheidenheid aan metabolisch energetische cellen binnen de traditie.
[Linking template=”default” type=”products” search=”Cell Proliferation ELISA Kit” header=”3″ limit=”18″ start=”2″ showCatalogNumber=”true” showSize=”true” showSupplier=”true” showPrice=”true” showDescription=”true” showAdditionalInformation=”true” showImage=”true” showSchemaMarkup=”true” imageWidth=”” imageHeight=””]