BEREIDING VAN GELEVERDE REAGENTIA PLAATLEZER

VOORZORGSMAATREGELEN EN VEILIGHEID

De ELISA-tests zijn tijd- en temperatuurgevoelig. Om onjuiste resultaten te voorkomen, volgt u strikt de stappen van de testprocedure en wijzigt u deze niet.

  1. Wissel geen reagentia uit verschillende partijen uit en gebruik geen reagentia uit andere in de handel verkrijgbare De componenten van de kit zijn nauwkeurig op elkaar afgestemd voor een optimale uitvoering van de tests.
  2. Zorg ervoor dat alle reagentia binnen de geldigheidsduur vallen die op de kitdoos en van dezelfde partij is Gebruik nooit reagentia na de vervaldatum vermeld op etiketten of dozen.
  3. VOORZICHTIG – KRITISCHE STAP: Laat de reagentia en monsters vóór gebruik op kamertemperatuur komen (20-25 ° C). Reagens voorzichtig schudden voor gebruik. Direct na gebruik terugbrengen bij 2-8 °
  4. Gebruik alleen voldoende volume van het monster zoals aangegeven in de Als u dit niet doet, kan dit een lage gevoeligheid van de test veroorzaken.

gentaur.be

1.  Raak de buitenbodem van de putten niet aan; vingerafdrukken of krassen kunnen het lezen verstoren. Zorg er bij het lezen van de resultaten voor dat de bodem van de plaat droog is en dat er geen luchtbellen in de putjes zijn.

  1. Laat de microtiterplaatwells na de wasstap nooit Ga onmiddellijk door naar de volgende stap. Vermijd de vorming van luchtbellen bij het toevoegen van de reagentia.
  2. Vermijd langdurige onderbrekingen van Zorg voor dezelfde arbeidsomstandigheden voor alle putten.
  1. Kalibreer de pipet regelmatig om de nauwkeurigheid van de verstrekking van monsters / reagentia te Gebruik voor elk monster en reagentia verschillende pipetpunten voor verwijdering om kruisbesmetting te voorkomen.
  2. Raak bij het toevoegen van monsters de bodem van de put niet aan met de

6.      Bepaal bij het meten met een plaatlezer de absorptie bij 450 nm.

7.     De enzymatische activiteit van het HRP-conjugaat kan worden beïnvloed door stof en reactieve chemicaliën en stoffen zoals natriumhypochloriet, zuren, logen, enz. Voer de test niet uit in aanwezigheid van deze stoffen.

  1. Alle monsters van menselijke oorsprong moeten als potentieel infectieus worden Strikte naleving van GLP-regels (Good Laboratory Practice) kan de persoonlijke veiligheid garanderen.

9.     Eet, drink, rook of breng nooit cosmetica aan in het testlaboratorium. Pipetteer nooit oplossingen via de mond.

  1. Chemische stoffen mogen alleen worden gehanteerd en verwijderd in overeenstemming met de huidige GLP (Good Laboratory Practices) en de lokale of nationale
  2. De pipetpunten, injectieflacons, strips en monsterhouders moeten worden verzameld en geautoclaveerd gedurende ten minste 2 uur bij 121 ° C of gedurende 30 minuten worden behandeld met 10% natriumhypochloriet om vóór verdere verwijdering te worden Oplossingen die natriumhypochloriet bevatten, mogen NOOIT worden geautoclaveerd. Material Safety Data Sheet (MSDS) beschikbaar op aanvraag.

12.  Sommige reagentia kunnen als grondstof toxiciteit, irritatie, brandwonden of carcinogene effecten veroorzaken. Contact met de huid en het slijmvlies moet worden vermeden, maar is niet beperkt tot de volgende reagentia: de stopoplossing, de substraatoplossing en de wasbuffer.

  1. De stopoplossing 2M H 2 ZO 4 is een Gebruik het met gepaste zorg. Veeg gemorste vloeistoffen onmiddellijk op en was ze met water als ze in contact komen met de huid of ogen.
  2. ProClinTM 300 0,1% als conserveermiddel gebruikt, kan huidgevoel Veeg gemorste vloeistoffen onmiddellijk op of was ze met water als ze in contact komen met de huid of ogen.

BEREIDING VAN MEEGELEVERDE REAGENTIA

  1. 1 ×Bereid 1x
    assaybuffer door de 5x assaybuffer (20 ml) te mengen met 80 ml gedestilleerd water of gedeïoniseerd water. 【 VOORZICHTIGHEID!!! Als er neerslagen worden waargenomen in de 5x assaybufferfles,verwarm de fles in een waterbad van 37 ° C tot de neerslag verdwijnt. Onvolledige ontbinding zal leiden tot een hoge achtergrond. De 1x assay-buffer kan maximaal een maand bij 2-8 ° C worden bewaard.

 

gentaur.be
gentaur.be

 

2.   1xWash-buffer

Bereid 1xWash-buffer door de 10xWash-buffer (40ml) te mengen met 360ml gedestilleerd water of gedeïoniseerd water. 【 VOORZICHTIGHEID!!!】 Als er neerslagen worden waargenomen in de 10xWash-bufferfles, verwarm de fles in een partij water van 37 ° C totdat de neerslag verdwijnt. Een onvolledige oplossing leidt tot een hoge achtergrond. De 1xWash-buffer kan maximaal een maand bij 2-8 ° C worden bewaard.

1.  1x detectie-antilichaamoplossing

Vortex en draai de 100 × detectie-antilichaamoplossing kort naar beneden en verdun de gewenste hoeveelheid van het antilichaam 1: 100 met 1 × assay-buffer. 100 m 1 putje van de 1 × detectie-antilichaamoplossing is vereist per putje. Bereid slechts zoveel 1 × detectie-antilichaamoplossing als nodig is. Breng de 100 × detectie-antilichaamoplossing onmiddellijk terug naar 2-8 ° C nadat het benodigde volume is verwijderd.

MONSTERVOORBEREIDING

Serum- of plasmamonster vereist een 100-voudige verdunning in de 1 × assaybuffer. Een voorgestelde verdunningsstap is om 10 µl monster toe te voegen aan 990 µl 1 × assaybuffer.

ASSAYPROCEDURES

Stel alle reagentia vóór gebruik ten minste 30 minuten op kamertemperatuur (20-25 ° C).

 

 

 

Stap 1

Negatieve controle, testmonster en blanco toevoegen:

Voeg 50 μl negatieve controle, 100 μl testmonster en 100 μl 1 x assaybuffer als blanco toe aan hun respectievelijke wells. Drievoudige test wordt aanbevolen voor negatieve controle en dubbele test wordt aanbevolen voor blanco en testmonsters.

 

Opmerking: Gebruik voor elk testmonster, negatieve controle en blanco een afzonderlijke wegwerppipetpunt om kruisbesmetting te voorkomen. Meng door zachtjes op de plaat te tikken.

Stap 2 Incubatie:

Bedek de plaat en incubeer gedurende 1 uur bij kamertemperatuur.

 

 

Stap 3

Wassen:

Gooi de inhoud weg en tik op de plaat op een schone papieren handdoek om de resterende oplossing in elk putje te verwijderen. Voeg 300 µl 1 × wasbuffer toe aan elk putje en incubeer gedurende 1 minuut. Gooi de 1 × wasbuffer weg en tik op de plaat op een schone papieren handdoek om de resterende wasbuffer te verwijderen. Herhaal de wasstap voor in totaal 3 wasbeurten.

Stap 4 HRP-geconjugeerde detectieoplossing toevoegen:

Voeg aan elk putje 100 µl 1 × detectieoplossing toe.

Stap 5 Incubatie:

Bedek de plaat en incubeer gedurende 1 uur bij kamertemperatuur.

Stap 6 Wassen:

Was elk putje 4 keer zoals beschreven in stap 3.

 

Stap 7

Kleur:

Voeg 100 µl substraatoplossing toe aan elk putje en incubeer gedurende 15 minuten bij

kamertemperatuur. Bescherm tegen licht.

 

Stap 8

Reactie stoppen:

Voeg 100 µl stopoplossing toe aan elk putje en tik zachtjes gedurende enkele seconden op het plaatframe om een

grondige menging te garanderen.

 

Stap 9

Meting:

Meet onmiddellijk de absorptie van elk putje bij 450 nm. Let op: lees de absorptie binnen 10

minuten na het stoppen van de reactie.

 

gentaur.be
gentaur.be

VOORBEELDREGELING VAN DE AFGIFTE VAN CONTROLES / SPECIMENS:

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
EEN Blank Voorbeeld 2
B Blank Voorbeeld 3
C Neg. Voorbeeld 3
D Neg.
E Neg.
F Voorbeeld1… G
Monster1 H
Voorbeeld 2

 

KWALITEITSCONTROLE

Elke microtiterplaat moet afzonderlijk worden overwogen bij het berekenen en interpreteren van de resultaten van de assay, ongeacht het aantal gelijktijdig verwerkte platen. De resultaten worden berekend door de absorptiewaarde van elk monster te relateren aan de afkapwaarde.

De testresultaten zijn geldig als aan de criteria voor kwaliteitscontrole is voldaan. Het wordt aanbevolen dat elk laboratorium een geschikt systeem voor kwaliteitscontrole instelt met materiaal voor kwaliteitscontrole dat vergelijkbaar is met of identiek is aan het te analyseren patiëntspecimen.

– De absorptiewaarde van de negatieve controle moet <0,200 bij 450 nm zijn.

TYPISCHE RESULTATEN (alleen voorbeelden)

 

Monsters OD450
 

Negatieve controle

0.107
0,099
0.113
0.120
 

Serum van gezonde proefpersonen

0.112
0.148
0.161
Serum van COVID-19

patiënten

1.373
2.024
0,582

CUT-OFF WAARDE

Absorptie 450nm Indicatie
<0,20 Negatief
³ 0,20 Positief

Deze afkapwaarde is gevalideerd in ImmunoDiagnostics, maar het wordt ten zeerste aanbevolen dat elk laboratorium zijn eigen normale en pathologische referentiebereik voor anti-NP vaststelt

IgG-niveaus. Bovendien wordt ook aanbevolen dat elk laboratorium zijn eigen panel controlemonsters in de assay opneemt.

PRESTATIEKENMERKEN

 

Gevoeligheid 92,5% (n = 60)
Specificiteit 93,33% (n = 180)
Inter-assay precisie
Monsters CV
1 5,66%
2 6,75%
3 5,16%
Intra assay precisie
Monsters CV
1 4,73%
2 6,51%
3 5,68%

 

Klinische validatiestudie van ImmunoDiagnostics SARS-CoV-2 NP IgG ELISA werd uitgevoerd in 2020 in Shenzhen, China. Monsters werden verzameld uit door COVID-19 bevestigde gevallen met klinische symptomen, laboratoriumafwijkingen of manifestaties van pulmonale beeldvorming. Er zijn geen tests uitgevoerd op monsters van latente infecties of patiënten tijdens de incubatieperiode.

De kit vertoonde een hoger positief detectiepercentage bij monsters van patiënten met een vertraagd begin. Daarom moet bij de interpretatie van de testresultaten rekening worden gehouden met de verzameltijd van het monster.

 

INTERPRETATIES VAN DE RESULTATEN

Negatief resultaat (absorptie / cut-off van het monster ≦ 0.9):

  • Het testresultaat is negatief wanneer de verhouding tussen de absorptie van het monster en de afkapwaarde gelijk is aan of kleiner is dan 0,9. Een negatief resultaat geeft aan dat er geen SARS-CoV-2 NP-antilichamen zijn gedetecteerd met ImmunoDiagnostics SARS-CoV-2 NP IgG ELISA, daarom geen serologische indicatie van COVID-19 momenteel of in hetPositief resultaat (absorptie / cut-off van het monster ≧ 1.1):
  • Het testresultaat is positief wanneer de verhouding tussen de absorptie van het monster en de afkapwaarde gelijk is aan of groter is dan 1,1. Positief resultaat geeft aan dat SARS-CoV-2 NP-antilichamen zijn gedetecteerd met ImmunoDiagnostics SARS-CoV-2 NP IgG ELISA en kunnen worden gebruikt als serologische indicaties van COVID-19 op het moment van testen of in het Borderline-resultaat (absorptie / cut-off van monster = 0,9-1,1):
  • Het testresultaat wordt als grensresultaat beschouwd wanneer de verhouding tussen de absorptie van het monster en de afkapwaarde tussen 0,9 en 1,1 ligt. Monsters met grensresultaten zijn op het moment van testen niet te interpreteren.
  • Het wordt sterk aanbevolen om vóór de diagnose andere klinische en laboratoriumgegevens te integreren, aangezien de klinische diagnose niet mag worden vastgesteld op basis van slechts één soort

BEPERKINGEN

Positieve resultaten moeten worden bevestigd met een andere beschikbare methode en geïnterpreteerd in combinatie met de klinische informatie van de patiënt.

1.  Antilichamen zijn mogelijk niet detecteerbaar in het vroege stadium van de ziekte en bij sommige individuen met immuunonderdrukking. Daarom zijn negatieve resultaten verkregen met ImmunoDiagnostics SARS-CoV-2 NP IgG ELISA slechts een indicatie dat het specimen geen detecteerbaar niveau van antilichamen bevat en mag een negatief resultaat niet worden beschouwd als overtuigend bewijs dat het individu niet is geïnfecteerd met het virus.

2. Er kunnen vals-positieve resultaten optreden vanwege de verschillende redenen, waarvan de meeste verband houden met, maar niet beperkt zijn tot een ontoereikende wasstap. Neem voor meer informatie over ImmunoDiagnostics ELISA-probleemoplossing contact op met de technische ondersteuning van ImmunoDiagnostics voor verdere.

3.  De meest voorkomende assayfouten zijn het gebruik van kits na de vervaldatum, slechte wasprocedures, gecontamineerde reagentia, onjuiste assayprocedures, onvoldoende aspiratie tijdens het wassen, het niet toevoegen van monsters of reagentia, onjuiste werking met laboratoriumapparatuur, timingfouten, de gebruik van sterk gehemolyseerde specimens of specimens die fibrine bevatten, onvolledig geklonterde serummonsters.

4. De prevalentie van de marker heeft invloed op de voorspellende waarden van de

5.  Deze assay kan niet worden gebruikt om gepoold (gemengd) serum of plasma te testen. De kit is alleen beoordeeld met individuele serum- of plasmamonsters.

6. ImmunoDiagnostics SARS-CoV-2 NP IgG ELISA is een kwalitatieve assay en de resultaten kunnen niet worden gebruikt om de antilichaamconcentratie te

 

 

gentaur.be
gentaur.be

SYMBOLEN

Fabrikant EG-conformiteitsverklaring
 

Vervaldatum

Raadpleeg instructie
Lotnummer  

Op te slaan

 

Catalogus nummer

 

Voorzichtigheid

In vitro Diagnostisch apparaat Bio gevaar
 

Negatieve controle