arachis-hypogaea-pinda

Abstract

Pinda (Arachis hypogaea) agglutinine (PNA) wordt veelvuldig gebruikt als tumormarker omdat het het kankerspecifieke T-antigeen (Galbeta1–>3GalNAc-) sterk herkent, maar niet de gesialyleerde versie ervan. Er werd echter een extra specificiteit voor Galbeta1–>4GlcNAc (LacNAc), die niet tumorspecifiek is, toegeschreven aan PNA.

Voor een correcte interpretatie van de histochemische resultaten van lectine hebben we de PNA-suikerspecificiteit onderzocht met behulp van natuurlijk voorkomende of semi-synthetische glycoproteïnen, matrix-geïmmobiliseerde galactosiden en lectine-bindende weefselglycoproteïnen, in plaats van mono- of disacchariden als liganden. Dot-blots, transferblots of polystyreenplaatcoatings van de oplosbare glycoconjugaten werden onderzocht met mierikswortelperoxidase (HRP)-conjugaten van PNA en andere lectines met bekende specificiteit. Modificaties van PNA-bindende glycoproteïnen, waaronder selectieve verwijdering van O-gebonden oligosachariden en behandeling met glycosidasen onthulden dat Galbeta1–>4GlcNAc (LacNAc) niet effectief was, terwijl terminale alfa-gebonden galactose (TAG) en blootgesteld T-antigeen (Galbeta1–>3 GalNAc-) was uitstekend als suikergroep in glycoproteïnen voor hun herkenning door PNA. Wanneer geïmmobiliseerd, melibiose was superieur aan lactose in PNA-binding. De resultaten werden bevestigd met behulp van TAG-specifiek humaan serum anti-alfa-galactoside antilichaam.

Arachis hypogaea (pinda) lectine (PNA) – HRP

Affiniteitsgezuiverd PNA wordt geconjugeerd aan het mierikswortelperoxidase (HRP) enzym. HRP wordt het meest gebruikt voor blotting, immunoassays en immunohistochemische methoden. Het is een eiwit van 40 kDa dat de oxidatie van substraten door waterstofperoxide katalyseert, wat resulteert in een gekleurd of fluorescerend product of het vrijkomen van licht als bijproduct van de reactie. Dit product wordt geleverd in een gestabiliseerde vloeibare vorm. Voor substraatgebruik van HRP-gelabelde eiwitdetectie bieden wij onze Intensive ChemiLuminescence (ICLTM) kit (SKU: 20810000). ICL is een tweecomponentensubstraat dat een stabiele luminoloplossing bevat met een versterker en een stabiele peroxidebufferoplossing. Het heeft een sterke lichtemissie en een gevoeligheid op picogramniveau die zeer geschikt is voor de snelle detectie van HRP-geconjugeerde eiwitten. Voordelen van chemiluminescente substraten ten opzichte van andere detectiemethoden zijn onder meer meerdere blootstellingen, blots kunnen opnieuw worden onderzocht, detecteert en kwantificeert een breed scala aan eiwitconcentraties en levert de grootste gevoeligheid van elke beschikbare methode op. We bieden ook 3, 3, 5, 5-tetramethylbenzidine ( TMB, SKU: 42000012) en TMB OneTM (TMB 1) HRP-substraat voor HRP-gelabelde detectie. TMB is een geschikt substraat voor de immunoassay van mierikswortelperoxidase en is een niet-carcinogeen derivaat van benzidine met een absorptie bij 450 nm. Oxidatie van TMB door HRP levert een gekleurd product op. s TMB 1TM is een ééncomponent peroxidasesubstraat (SKU: 21530073). 5-Tetramethylbenzidine (TMB, SKU: 42000012) en TMB OneTM (TMB 1) HRP-substraat voor HRP-gelabelde detectie. TMB is een geschikt substraat voor de immunoassay van mierikswortelperoxidase en is een niet-carcinogeen derivaat van benzidine met een absorptie bij 450 nm. Oxidatie van TMB door HRP levert een gekleurd product op. s TMB 1TM is een ééncomponent peroxidasesubstraat (SKU: 21530073). 5-Tetramethylbenzidine (TMB, SKU: 42000012) en TMB OneTM (TMB 1) HRP-substraat voor HRP-gelabelde detectie. TMB is een geschikt substraat voor de immunoassay van mierikswortelperoxidase en is een niet-carcinogeen derivaat van benzidine met een absorptie bij 450 nm. Oxidatie van TMB door HRP levert een gekleurd product op. s TMB 1TM is een ééncomponent peroxidasesubstraat (SKU: 21530073).

Sollicitatie

Algemeen Western Blot-protocol:

Glycoproteïne steekproefomvang: 500ng
Lectineconcentratie: 0,1 ug/ml

Laad monsters met 500 ng glycoproteïne per baan
Voer 4-20% Bis-Tris SDS-paginagel uit
Breng gel over naar een PVDF-membraan
Blokmembraan gedurende 1 uur bij kamertemperatuur met RIPA-buffer (R0278 Sigma)
Incubeer HRP-lectine bij 0,1 ug/ml met RIPA-buffer gedurende 2 uur bij RT
Membraan 5 x 5 minuten wassen met 25 ml RIPA-buffer
Detecteren met chemiluminescent substraat (CPS1-120)

Biochem / Fysiol-acties

PNA agglutineert normale humane erytrocyten niet, maar agglutineert sterk met neuraminidase behandelde erytrocyten. PNA heeft een krachtige anti-T-activiteit die vergelijkbaar is met het anti-T-antilichaam in humane sera. De lectine kan worden gebruikt om onderscheid te maken tussen subsets van menselijke lymfocyten.

Eenheidsdefinitie

Een eenheid vormt 1 mg purpurogallin in 20 sec van pyrogallol bij pH 6,0 bij 20 ° C.

Fysieke vorm

Bevat natriumcitraat

Voorbereiding Opmerking:

Bereid uit peroxidase (P8375) met behulp van een wijziging van een gepubliceerde methode, die conjugaten met een laag molecuulgewicht begunstigt. Opnieuw gezuiverd na conjugatie door affiniteitschromatografie.

[Linking template=”default” type=”products” search=”hypogaea peanut” header=”3″ limit=”26″ start=”1″ showCatalogNumber=”true” showSize=”true” showSupplier=”true” showPrice=”true” showDescription=”true” showAdditionalInformation=”true” showImage=”true” showSchemaMarkup=”true” imageWidth=”” imageHeight=””]